PCR反应鉴定阿尔兹海默症模型鼠子代的基因型

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实验40 PCR反应鉴定阿尔兹海默症模型鼠子代的基因型APPSWE转基因小鼠，又被称为Tg2576小鼠，最早由Hsiao等创建，将引发人类早发型瑞典家系阿尔茨海默病(Alzheimers disease， AD)的App695双突变基因(K670N， M671L)通过仓鼠朊病毒蛋白载体导入B6SJL小鼠，取其下-代鼠与C57BL/6小鼠交配而得。APPSWE转基因小鼠子代鼠基因型的鉴定，根据 Jackson 动物中心设计合成引物序列，上5-GACTGACCACTCGACCAGGTTCTG-3，下游5-CTT GTAAGTTGG ATTCTCATATCC G-3，以基因组DNA为模板，PCR扩增 APP基因，其产物大小为 350 bp，扩增产物与预计所扩增APPswe基因大小-致的子代鼠即为APPswe阳性表达鼠。
1、基因组DNA提取的原理
DNA是-切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞；苯酚和氯仿可使蛋白质变性，用其混合液（酚：氯仿：异戊醇）重复抽提，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质；利用RNase降解RNA，从而得到纯净的DNA分子。
用酚抽提细胞DNA时的作用是使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的优点：(1)有效变性蛋白质；(2)抑制了DNase的降解作用。缺点：(1)能溶解10-15%的水，从而溶解-部分poly(A)RNA。(2)不