高效液相色谱仪的使用和维护

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DOI：10.3969/].issn.1001-232x.2013.03.017Use and maintenance of high performance liquid chromatograph.Song Limin ，Song Li。，Wang Yuyu (1.Jining Medical College，Rizhao 276826，China；2.Cheng WU country Chinesesmedicine Hospital，Heze 274200，China)HPLC is widely used in many fields.Established on my own experience，I state some prob-lems should be noticed during the using of HPLC SO as to achieve the objective of reduce consumeexpend and increase of service life of the instrument。

近年来，随着科技的迅速发展，高效液相色谱仪在化工、医药、生物、食品等领域应用 日益广泛，它越来越成为分析实验室的常用仪器。又因为此仪器主要靠进口，无论仪器本身还是与之相对应的配件和耗材，价格都比较昂贵，所以使用和维护好它显得十分重要。就目前的实际情况，与高效液相色谱仪的应用发展速度相比，其使用和维护则相对滞后，很多使用者不甚重视了解仪器的原理和结构，不注意科学的使用和维护，从而造成对仪器的滥用和对耗材不必要的浪费，这样是非成惜的。

笔者根据自己的经验，阐述仪器在使用中应注意的几个问题，提示有关读者重视液相色谱仪的使用技术，以达到延长仪器的使用寿命，增加色谱柱的使用次数的目的。

1 对流动相的要求1.1 流动相通常是由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成。因此所使用的水应是超纯水或二次重蒸水，有机溶剂用色谱纯。

1.2 流动相的pH，因柱填料的不同，pH的范围有所不同，常温下无定形硅胶在纯水中的溶解度约为100mg/L，考虑到溶解速度的影响，对于硅胶基质的填料，其所能承受的流动相 pH范围约 1～8 L1]。键合相硅胶填料则 由于键 和层 的屏蔽作用 ，使填料对流动相的适应范围大大增加，如 C18(十八烷基硅烷键合硅胶)，其 pH适用范围可达 2～10。当流动相PH超出酸性范围时，键合相易发生水解而流失；当流动相 PH超出碱性范围时，会加速硅胶的溶解而释放出絮状物堵塞柱子，这种反应均是不可逆反应 。

1.3 流动相的温度，-般以硅胶基质的色谱柱最高使用温度不超过 6O℃，以低于 40℃为宜。温度过高会加速键合相水解和硅胶的溶解，从而使填料性质改变，柱塌陷，降低柱效。最低使用温度不超过 0℃。

1.4 流动相要过滤，因为液相色谱仪流路系统制造精细，管路直径很小，微粒和灰尘会导致流路堵塞和柱污染。-般用孔径为 0.45 m 的微孔滤膜，滤膜要注意区分水系和油系，二者不可混用，以防止滤膜溶解而造成污染。吸滤器要定期清洗，以避免吸滤器因过载而起不到过滤作用。在使用缓冲盐的流动相时，如放置-段时间后再使用，就要重作者简介：宋丽敏，1966年出生，高级工程师。E-mail：songlimin 139###sina.com。

2013年第3期 分 析 仪 器 71新过滤，因为缓冲盐溶液如磷酸盐溶液易滋生细菌。

1.5 流动相要脱气，通常液体内都溶解-些氧，这些氧-旦进入流路，由小气泡聚集成大气泡，影响正常的分析。气泡进入泵内，影响流量的稳定性，量大了还可使泵无法工作。气泡进入检测器，会在色谱图上出现尖锐的线状峰；气泡进入色谱柱，会使流动相的流速变慢或出现流速不稳定，基线起伏。气泡-旦进入色谱柱，排除很费时间。

2 平衡色谱柱在进样品之前，要用流动相平衡好色谱柱，大约所用流动相的体积相当于 1020倍柱体积，待基线稳定，方可进样。

3 控制好检测器的开闭时间3.1 在进样之前要提前打开检测器，以紫外检测器为例 ，氘灯打开后，需经过-段时间 ，光源才能稳定 ，在记录仪上看到基线稳定 ，才能进样 ，这个时间大约需要 2030分钟。3.2检测完毕，立即关闭检测器。氘灯的使用是有-定寿命的，以前-般建议使用时间为 2000h，近几年不少液相厂家建议最好使用 lO00h后更换。笔者认为，每个氘灯的质量都不-样，具体时间可视灯的能量而定，因此我们要尽量不要浪费氘灯的使用时间，走完样品，立即关掉检测器。

4 要冲洗好进样器进样器有手动式和 自动式，虽说 近来 系统 的 自动化快速发展，但 目前主要使用的仍然是手动式的进样阀。应该注 意的是：进样完毕 ，在 冲洗 柱的 同时，要清洗进样阀。在装样(1oad)位置和进样(in-jection)位置，冲人数毫升的溶剂 ，清洗进样器 ，若所进样品是水溶性的要先用纯水冲洗，再用甲醇冲洗；若所进样品为有机溶剂，则仅用甲醇冲洗即可。

如果不冲洗进样器，样品和溶剂残留在进样器内，待下次再使用时，残留物会随新样品进入色谱柱干扰分析。

5 认真维护色谱柱样品的分析是在色谱柱里进行的，色谱柱是液相色谱分析的的核心，-根色谱柱若正确地使用，可以使用很长时间，若使用不当很快就会坏掉，因此维护好色谱柱非常重要。

维护好色谱柱，除以上讲的对流动相的要求，还要认真地冲洗色谱柱。

5.1 走完样品，要马上冲洗色谱柱，否则杂质滞留在里面，就会导致色谱柱性能降低，以至很快报废。

目前我们所常用的C18的柱子，如果流动相含缓冲盐-定要用水相置换-下柱 内环境，建议用 10 的异丙醇-水冲洗，再用甲醇-水(80：20)冲洗，最后用纯甲醇冲洗。如果流动相是有机相-水，用 甲醇-水(80：20)冲洗，再用纯甲醇冲洗即可。

5.3 冲洗时间-定要够。不可草草了事 。-般情况下，流速在 lmL/min，每换-种液体，要冲洗约 3o分钟，特殊情况可以冲洗更长的时间。

5.4 色谱柱长期不用时，应收藏起来 ，键合相填料的色谱柱用甲醇冲洗后，从仪器上取下，用随柱所配的封头螺帽将柱两端密封，以防止柱 内溶剂蒸发。注意不要强烈震动、碰撞、弯曲。

5.5 将色谱柱编号，记录色谱柱使用的历史。有条件的最好-根柱子只用于分析某-类结构相似的物质，以避免样品对色谱柱的交叉污染，延长柱使用寿命。

6 注意对仪器硬件的维护仪器若长期不用，系统要保持在 甲醇环境 中。

室内要注意通风、防潮，要定期开机运行，以避免电路板因潮湿而损坏 。