高效液相色谱仪的维护

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泵的种类很多，目前应用最多的是柱塞往复泵。为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，须按照下列注意事项进行操作：①防止任何固体微柳入泵体 ，常用 的方法就是过滤∩采用O.45p.m以下的滤膜过滤，同时输液泵的滤器应经常清洗或更换。

②流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，必须泵人纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂。

③泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。

④输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。

⑤流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性 ，如果有大量气泡，泵就无法正常工作。

如果输液泵产生以下故障，须查明原因，采取相应措施排除故障：①没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是泵内有大量气体 ，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量下运转，将气泡排尽，也可用-个针筒在泵出13处抽气。另-可能原因是密封环磨损，需更换。

②压力和流量不稳。原因可能是有气泡 ，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞 ，可卸下砂滤棒浸人流动相内超声除气泡 ，或将砂滤棒浸入稀酸内迅速除去微生物，或将盐溶解 ，再立即清洗。

③压力过高的原因是管路被堵塞 ，需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。

2、进样器的维护进样器的作用是将样品注入色谱仪，可分为手动注射进样器、手动进样阀(六通阀)和自动进样器3种。下面就手动进样阀和 自动进样器的维护做-简述。

手动进样阀具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需特别维修等特点。但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。使用时应眷转动阀，不能停留在中途，以免压力骤增。在HPLC系统中应使用平头注射器。

进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用O.45/.m的滤膜过滤。防止缓冲盐和其它残留物质等微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。

自动进样器：-般情况下 自动进样器很少出问题，但是-旦出现问题就非常麻烦，很难解决，灰尘是 自动进样器最大的威胁 ，常见的问题包括零件磨损和由灰尘引起的机械故障。

①零件磨损自动进样器的零件磨损包括针头、针座 、爪套、计量泵和六通阀转子的磨损。针座也是有寿命的，针座磨损严重时要及时更换。

针头使用时间长了也会有磨损 ，如发现针座的非正常磨损时-定要注意及时检查更换针头。

自动进样器使用时间长了以后还会有爪套磨损的问题，爪套磨损以后导致进样小瓶抓不牢或者抓到半途小瓶掉落。原因是橡胶老化和使用了规格大小不正确的小瓶。

自动进样器上有-个计量泵，这个部件比较隐蔽，磨损主要是密封垫圈的磨损，最好也要和泵的密封垫-起做更换。

六通阀转子的磨损比柱塞杆的磨损频率要高很多，问题也明显。

使用时间长了，特别是流动相使用缓冲盐过多，流动相和样品里边机械杂质多时，转子磨损得就更快了。磨损严重时就要考虑更换转子。

②机械故障自动进样器机械故障主要由空气中的灰尘引起 ，空气中的灰尘吸附在皮带、丝杠和齿轮上 ，增大了摩擦 ，严重时直接导致预定的动作不能完成，甚至仪器开机时自动进样器自检都不能通过，出现这种问题可以把仪器关掉，用干净的不掉纤维的无纺布去擦拭丝杠、皮带和齿轮等传动装置 ，擦不到的地方可以用手拉动皮带，然后再擦，有经验的可以把仪器外壳拆开来擦拭。注意千万不要往丝杠上随意抹润滑油。擦完以后重启仪器试-下，很多时候问题都能解决。

③针座堵塞取下针座，将针座倒接到液相泵上，(反冲)流速设置为5ml/min加压，-般的堵塞物都能立刻就给冲洗下来 ，如果冲不下来可以将针座放- - - - 458---到超声仪里超声，然后再接泵冲，或者干脆延长管路，边接泵坤边超声，然后装回去就可以了。

- 般的Cl8柱pH值范围都在2～8，流动相的pH值小于2时，会导致键合相的水解；当pH值大于 7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。-旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。根据情况选择合适pH范围的柱子。

②色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，作为今后评价柱性能变化的参考。在使用时注意以下情况 ：a、最好使用流动相溶解样品。

b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。

d、使用 HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命 ，提高柱性能。

新柱应先使用1O～2O倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线；如果使用的流动相中含有缓冲盐 ，应注意用纯水过渡”，即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗3O分钟以上，除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。

长期使用的色谱柱，往往柱效会下降∩以对色谱柱进行再生。

选择再生方法：极性固定相：正庚烷-氯仿-乙酸乙酯-丙酮-乙醇-水非极性固定相：水-乙腈-氯仿(或异丙醇)-乙腈-水4、检测器的维护检测器是 HPLC仪的三大关键部件之-。其作用是把洗脱液中组分的量转变为电信号。本文主要介绍最常见的紫外检测器的维护。

①参比池的能量，若能量值偏低，则被认为需要更换氘灯氘灯超过使用时间(最多2000小时)，需要更换氘灯。

②检测池中有气泡如何排除- 般情况下，很小的气泡会停留在检测池中，所以需要在池管路出口处加-个背压管，池中气泡不易在池中产生。(加背压：出13处加上- 段阻尼管增加压力1③如何清洗流通池- 般情况下 ，不要将池拆散，而是用仪器附带的工具进行清洗。

常用流程：水--甲醇- 异丙醇- 甲醇，或再用稀硝酸冲洗池流路。

④基线漂移，噪音增大的原因a、所用试剂不纯，应用色谱纯试剂。

5、数据记录及处理装置的维护早期的HPLC仪器是用记录仪记录检测信号，再手工测量计算。

其后，使用积分仪计算并打印出峰高、峰面积和保留时间等参数。80年代后，计算机技术的广泛应用使HPLC操作更加快速、简便、准确 、精密和自动化，现在已可在互联网上远程处理数据。计算机的用途包括三个方面：①采集、处理和分析数据；②控制仪器；③色谱系统优化和专家系统。主要从以下几个方面加以维护：①使用仪器厂家的正版操作软件，加密设备勿损坏和丢失。

④数据要有足够的存储空间，及时备份检测数据，以免丢失。

总结高效液相色谱仪属大型精密仪器，掌握-些必要的维护常识，对于每～位分析工作者尤为重要，既可保障工作的顺畅，又可延长仪器使用寿命，创造经济价值。