三聚氰胺液相色谱仪的检测方法分析

本资料包含pdf文件1个，下载需要1积分

三聚氰胺是工业中常用的-种化工原料，作为有机化工的中间产品应用于各个领域，最主要的用途是生产三聚氰胺-甲醛树脂。

然而若将三聚氰胺加入食品或者资料中，往往会导致很大的危害，最典型的例子就是 2008年的三鹿婴幼儿奶粉事件。也正是这个事件，让三聚氰胺家喻户晓又臭名昭著。其实作为-种化学产品，三聚氰胺在化工生产中尧挥着重要作用。为了防止不法商贩利益熏心，将三聚氰胺加入到食品或者饲料中，我国出台了国家标准三聚氰胺检测方法 GB/T22388-2008。本文主要介绍利用液相色谱仪检测食品或者饲料中三聚氰胺含量的方法。

1三聚氰胺的物理、化学性质三聚氰胺俗称蛋白精，又叫蜜胺，分子式为 C3H6N6，相对分子质量为 i26.15，按照分子结构叫做2，4，6-三氨基-I，3，5-三嗪，属于三嗪类含氮杂环有机化合物，在化工生产中占据重要地位。

纯净的三聚氰胺呈乳白色单斜棱晶体，在室温下 (16摄氏度)密度为 1.573g/L，无味。三聚氰胺虽然是-种有机物，但并不溶与醚、四氯化碳和苯等常见的有机溶剂，在冷水中微溶，溶于热水。

在 2O摄氏度时，在水中的溶解度为 3.3g/L，溶解度随着温度的升高而增大。另外，三聚氰胺也可以溶解于乙酸、甲醛、甲醇、甘油、吡啶和热乙二醇等有机物。

三聚氰胺在强酸或者强碱的条件下会发生水解反应，分子中的胺基被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺，然后随着水解反应的继续发生生成三聚氰酸-酰胺，最后生成三聚氰酸。

2检测过程2.1检测标准选择食品中三聚氰胺的检测标准分为原料乳与乳制品中的三聚氰胺检测和饲料中的三聚氰胺检测，这两种检测执行的标准是不同的。

在原料乳和乳制品中，三聚氰胺的检测标准为GB/T22388-2008，而饲料中三聚氰胺的检测标准为NY/T1372.29-2007。

2.2检测试剂选择(1)检测所用的试剂，均为分析纯，溶液均为水溶液 (溶剂为超纯水)。

(2)将 5mL氨水溶于 lOOmL甲醇中，制成，氨水甲醇溶液。

(3)质量分数为22g/L的乙酸铅溶液，配置方法是将 22g乙酸铅溶解在 300mL水中，再将溶液扩容至 1L，摇匀。

(4)将 200mL甲醇与 800mL水混合，制成 20%的甲醇溶液。

(10)标准储备液：将 lOOmg三聚氰胺在 lOOmL的容量瓶中与20%的甲醇水溶液混溶， 制成标准储备液体。注意，三聚氰胺的重量应当精确到小数点后-位，避光存放，存放温度为 4摄氏度。

(11)标准中间液：将 5mL标准储备液在 50mL的容量瓶中与2O%的甲醇水溶液混溶，得到浓度为 100 u g/mL的溶液。溶液避光存放，存放温度为4摄氏度。

标准448 I华东科技(12)标准品工作液：分别取 0.50mL、1.O0mL、2.OOmL、5.OOmL、10.OOmL的标准中间液体在 lOOmL的容量瓶中，与20%的甲醇水溶液制成标准品工作液。溶液避光存放，存放温度为 4摄氏度。

三聚氰胺浓度单位 l g/mE储备液 l 1000中间液 l 100工作液 1 0.5 l 1.0 l 2.0 I 5.0 I 10.0标准工作液的浓度可以根据试剂情况进行选择，如果只对某-点进行检测，只需配置与之接近的标准工作液。

标准品谱图如下：图1标准品色谱图 (仅以2.0 u g/mL含量的色谱图为例)检测标准品曲线/ / / 图2检测标准品曲线图3检测样品预处理3.1预处理原理样品经沉淀脂肪和蛋白质，将样品的PH调至中性，过滤，将样品送入高效液相色谱仪，经过反相色谱分离之后，就可以根据谱图中的保留时间和峰面积进行定量和定性操作。

(2)缓缓加入 20ml三氯乙酸溶液，振荡容量瓶，超声提取 lO-2O分钟之后在加入乙酸铅溶液，将容量瓶中的混合溶液稀释到刻度线。

(3)溶液静置三十分钟以后，用滤纸过滤，再将滤液经过滤膜过滤，最终得到的滤液做液相分析使用。在有些时候，经滤纸过滤的滤液还需要净化处理，方法如下：-是小柱活化。分别用 3mL甲醇和 3mL水活化小柱，注意顺序，先甲醇后水；二是上样：准确吸取 lOmL(可根据实验情况调整)滤液转移至固相萃取柱中：三是净化：再用 3mL水和 3mL甲醇分别洗涤，抽至近干；四是洗脱：用 6mL氨化甲醇溶液洗脱，收集全部洗脱液；五是控制流速在 lmL/min以内：六是洗脱液于 5O℃下用氮气吹干，残留物用 lmL流动相(或 20%甲醇水溶液)溶解，摇匀混合 Imin，供液相测定用。

4检测色谱条件4.1色谱条件选择(1)流速为 lmL/min，进样量为 1O u L。

(3)根据保留时间进行定性操作，根据外标峰面积进行定量操作 。

科技论坛(4)色谱柱为c18或者c8柱，4.6mm×250mm，5 um。

(5)将 2.02g庚烷磺酸钠与 2.1Og柠檬酸溶解成 lL溶液，取其中的 900mL和 lOOmL乙腈，混匀制成流动相。

4.2 检测样品谱图幽 35检测调节流动相流动相： 水 ：乙腈 90：10，适宜大多数样品。

可以通过增加水相的方式推迟峰的出现时间，增大分离率。

6计算方法液相色谱仪检测三聚氰胺的结果计算使用的是外标法。

单点法公式为：： 盘! !皇c标×多点法公式为； -Ct，-O在公式中，X(mg/kg)表示样品含量，C (u g/m1)表示标准使用液浓度，D(mL)表示样品稀释液总体积，C (u g/m1)样表示样品浓度，m(g)表示样品质量，A 是指标样峰的面积，A#是指样品峰面积。

在对于检测结果的计算，还要求两次测定的结果的绝对差不能超过算术平均值的 10%。液相法检出限为 2mg/kg，检测结束后，打屿测色谱图存档，并把标样、样品的色谱图、检测记录存于仪器工作站中。

7结果分析用此种方法对四种食品，经过处理后对其进行检测，检测结果如下表所示：测量值(mg/kg) 食品种类 平均值 (mg/kg) 相对标准偏差 RsD96 l 2 3 4 5 6纯牛奶 2.984 2.992 3.093 3.100 3.058 3.046 3.046 l6l脱脂牛奶 4.882 5.031 4.823 5.170 4.932 5.086 4.987 2.63冰淇淋 O 0 0 0 0 0 0 奶糖 O O 0 0 0 0 0 f从中可以看出，此种测量方法测量结果的相对标准偏差皆小于算术平均值的百分之十，符合方法允差要求。

同时还向四种食品中添加三聚氰胺标准溶液，对回收率进行了检测，结果如下：食品种类 含量 (mg/kg) 加标量 (mg/kg) 加标后结果 (mg/kg) 回收率%牛奶 3.046 5.000 7.890 98.O全脂奶粉 4.987 5.000 8.771 98.O冰淇淋 0 5.000 3.240 65.0奶糖 0 5.000 4.050 81.0从中可以看出此种方法的回收率也很不错8结束语液相色谱仪检测三聚氰胺具有快速、准确等优点，在实际检测中经常用到 化学分析是-门精细的学科，在检测过程中，要认真对待每-步操作，保证检测结果的准确性。